A partir d'une culture d'Escherichia Coli (Bactérie: organisme haploïde), on ensemence un milieu solide minimum ( sels minéraux + sucre) auquel on ajoute les trois substances suivantes :
thréonine (T)
phénylalanine (P)
vitamine B1 (B)
On obtient ainsi quatres colonies qui se développent n°1,2,3 et 4 comme l'indique la figure a.

On effectue ensuite sur trois milieux I, II et III des repiquages au cours desquels la position des clones ( colonies) est conservée ( voir figures b,c et d), seul le clone 4 se développe sur les milieux I, II et III .

En tirant les informations essentielles des figures, donnez le phénotype des clones 1 à 4. Le signe + indiquera que les bactéries sont capables de synthétiser l'élément: exemple [T+], le signe - qu'elles en sont incapables: exemple [T-].

L'expérience de Anfinsen.
L'expérience porte sur une enzyme digestive présente dans le suc pancréatique. Il s'agit de la ribonucléase, enzyme de 124 acides aminés, contenant quatre liaisons disulfures ( liaisons s'établissant entre deux acides aminés particuliers nommés cystéine) assurant le repli dans l'espace de la protéine selon une configuration spatiale précise. Anfinsen traite une ribonucléase active par des agents dénaturants, (urée et mercaptol-éthanol).
Les liaisons disulfure sont alors rompues, alors que la structure primaire (séquence des acides aminés) de la protéine n'est pas altérée (La molécule s'est en quelque sorte dépliée, mais elle ne s'est pas coupée). Cette molécule dénaturée n'a alors plus d'activité enzymatique.

Comment expliquez vous, de manière simple, cette perte d'activité de la ribonucléase?

Maîtriser le vocabulaire scientifique.

Complétez le texte suivant avec certains des mots suivants: allèle, codons, ADN, ARNm, nucléotide, base, non décalante, décalante, substitution, délétion, addition, protéine, polypeptide, enzyme, transcription, traduction, acide aminé, gène.

Dans la (ou le).....................................Tha 1 , à cause de l' (ou la)........................................... de (ou du)...............................T par A au 52 ^ième .................................au niveau de l' (ou la)..........................., on trouve un codon stop (UAG) au niveau de (ou du) ...................................... d'ou la ................................... de la protéine Tha1 s'arrête.
Dans la protéine Tha 4, on retrouve un ........................................: la glycine ( ............................GGG) au niveau du 7^ième ................................. à cause de la délétion de (ou du). ........................................... A au niveau du 20^ième .................................................... de l'......................................... .
Cette mutation qui est ..........................................., provoque des différences dans la séquence des ........................................... au niveau de la .................................................... à partir du 7ième .................................... et l'apparition d'un codon stop au niveau du 18^ième .............................. de l'ARm.

Comprendre l'effet d'une substance sur une réaction enzymatique:

la lactase est une enzyme qui catalyse l'hydrolyse d'un substrat, le lactose (C₁₂H₂₂O₁₁), en glucose (C₆H₁₂O₆)et galactose (C₆H₁₂O₆). La vitesse initiale de la réaction d'hydrolyse a été déterminée en fonction de la concentration en substrat du milieu de réaction (courbe 1), lors d'une seconde série d'expériences, du thiolactose (C₁₂H₂₂O₁₀S)a été ajouté au milieu de réaction (courbe 2).

1°) Ecrire l'équation de la réaction d'hydrolyse.
2°) Quel est l'effet sur la réaction de l'ajout de thiolactose?
3°) Comment le thiolactose peut-il agir?

Restitution des connaissances:

Légendez le schéma suivant: